超微量分光光度计是一种应用于分析和检测微小分子浓度的仪器,主要用于分析和检测生物分子和化学分子的含量和质量。其工作原理基于分子吸收不同波长光线的能力,通过光线通过样品引起的吸收程度来确定溶液的浓度。以下将详细介绍其工作原理和使用方法。
一、工作原理
1.光源:超微量分光光度计使用的是可见光和紫外线的光源,普遍采用卤素灯,阳极氧化铝、聚酰亚胺和钨激发灯等。
2.分光仪:分光仪通过将可见光和紫外线分解为不同的波长,根据不同波长的吸收情况来分析样品的浓度。分光仪使用的是一组设计好的光栅来分离光线,每个光栅能够分离一定范围内的波长。
3.样品池:样品池是在分光仪中放置样品的地方,通常采用石英或玻璃材质制成。
4.探测器:探测器是最重要的装置之一,负责接受样品池中吸收或透射的光,并将其转化为电信号。探测器通常采用光电二极管或光电multiplier管。
二、使用方法
1.校准超微量分光光度计:在使用前,需要对光度计进行校准,以确保其读数准确。校准过程中,需要使用标准物质,使用前需要将样品池清洗干净,在样品池中加入标准物质和标准溶液,设置波长,记录吸收测量值,并进行数据分析。
2.准备样品:将待测样品溶解在适当的溶剂中,将溶液放入洁净的样品池中。注意,样品应该尽可能稀释,以提高精度。
3.设置波长:选择波长,将分光仪设置为样品溶液所吸收的波长。
4.吸收测量:将样品池放入分光光度计中,使其测量样品的吸收值。在吸收测量过程中,要避免任何突然的振动,以及其他外来因素的影响,如电磁干扰等。
5.数据分析:将数据整理到工作文档中,进行进一步的比较和分析。