自动细胞计数仪法采用体细胞自动计数仪,设置有两个电极并设定脉冲的临界水平,当牛乳体细胞通过电极狭缝时会改变液体的电导性从而产生电脉冲,高过临界水平而被记录下来,从而计算出牛乳的体细胞数量。但此方法需要加入固定试剂甲醛,并需要培养10多个小时的试剂,前期处理麻烦且费时。
体细胞数(SomaticCellCount,SCC)指的是每毫升牛乳中的细胞总数。体细胞中大部分是白细胞(即淋巴细胞、嗜中性白细胞和巨噬细胞),大约占总数的98%~99%,剩余1%~2%的体细胞是乳腺组织上脱落的上皮细胞。
乳业发达国家把牛乳体细胞数量作为新鲜牛奶的收购标准之一,其体细胞数的测定已经成为一种日常工作。牛乳体细胞数的检测方法主要包括以下几种:
一、体细胞计数的标准方法
体细胞计数的标准方法是最早期的检测方法,采用显微镜检测,通过把牛奶涂抹于计数板中干燥,染色再干燥,清洗再干燥后,在显微镜下观察,人工计数并折算每毫升牛乳的体细胞数。此方法准确性高,可用作其他快速检测方法的校准方法,但该方法制作过程繁琐,需要的时间较多,不适合在奶厂进行现场实时检测。
二、荧光显微计数法
荧光显微计数法与牛乳体细胞计数的标准方法大致相同,其改进为对体细胞进行荧光染色,通过荧光显微镜进行检测,省去了多次干燥环节,但此方法依然费时费力。
三、CMT法
CMT方法属于化学方法,采用化学试剂破坏牛乳的体细胞,使其释放出DNA而产生沉淀或凝块,观察沉淀的多少可以间接判断出体细胞数的相对值。此方法是凭经验得到体细胞数的大致范围,不能得到具体数值。
四、自动体细胞计数仪法
自动体细胞计数仪法采用体细胞自动计数仪,设置有两个电极并设定脉冲的临界水平,当牛乳体细胞通过电极狭缝时会改变液体的电导性从而产生电脉冲,高过临界水平而被记录下来,从而计算出牛乳的体细胞数量。但此方法需要加入固定试剂甲醛,并需要培养10多个小时的试剂,前期处理麻烦且费时。
流式细胞计数法是自动体细胞计数仪法的衍生,其测定原理是用荧光染色剂对体细胞进行染色,染色后的细胞在激励光源的刺激下发射荧光信号,而仪器可将光信号转化为电信号,强迫细胞一个一个地通过缝隙管道并记录细胞个数。此方法在现有的各国先进细胞分析仪中使用,检测速度迅速但准确度不能保证,且价格普遍昂贵,用于大型卫生检测中心较多,而不具有普及到普通奶场的条件。